根结线虫生防菌的的筛选

指导教师姓名：崔汝强（博士）

1．研究目的

根结线虫（Meloidogyne spp.）是危害农业生产的一类重要植物病原物，广泛分布于世界各地，寄主达3000多种植物[1]，遍及蔬菜、粮食、果树及花卉等农经作物。江西省地处我国南方地区，作物种类多，属亚热带湿润季风气候，雨量充沛，光照充足，年平均气温16.3℃～19.7℃，有利于根结线虫的发生和繁殖。据不完全统计，江西省设施蔬菜主产区线虫病害的发生率达95％，受害区一般减产30％，严重者达70％以上甚至绝收，许多大棚在使用3-5年后不得不废弃重建，且病害呈逐年上升趋势。根结线虫的危害已成为制约江西省设施蔬菜生产可持续发展的突出问题。因此，对该病害的有效防治也倍受人们关注。

目前，根结线虫的防治仍然是生产上的一个难点。生产上主要用高毒、高残留化学杀线剂进行防治，对蔬菜的安全生产和环境均造成严重危害，并导致土壤质量严重退化。根结线虫寄主范围广，因此轮作措施也有较大的局限性，且对于一些特色蔬菜种植区无法达到合理轮作的要求。近年来，一些抗根结线虫的品种已在生产上使用，但抗性范围较小。因此符合现代农业可持续发展战略理念的生物防治方法成为根结线虫治理的重要措施之一。

2．实验方法和技术线路

2.1 实验方法

（1）样品采集

采集鄱阳湖地区设施蔬菜基地根结线虫发病不同程度根围土表下10cm的土样和部分作物根部。在解剖镜下，用解剖针和镊子从发病的作物根部根结中分离雌虫和卵；2龄幼虫由卵孵化获得；雄虫和部分二龄幼虫也可采用改良贝曼漏斗法（谢辉，2000）从根围土样中分离。

（2）根结线虫鉴定

制作会阴花纹；观察雌虫会阴花纹形态、雄虫和2龄幼虫头区特征、排泄孔位置、尾部特征等，测量体长、最大体宽、口针长、口针基部球大小、DGO、交接刺长、a值等。

（3）根结线虫发病不同程度条件下根际微生物优势种群

在根结线虫病发生严重的番茄田块中，选取发病程度不同和完全没有发病的植株，小心收集根际土壤，根据PDA平板培养筛选优势种群。

选取一块从未发生根结线虫病和一块年年发病的番茄地，在发病季节小心收集根际土壤，利用上述方法分析根际细菌的优势种群差异。

（4）根系分泌物筛选培养基在强定殖能力菌株筛选中应用

利用番茄根际主要分泌物--果胶为碳源的培养基，采用富集培养的方法回收根际微生物。通过纯化后，编号保存，备用。

（5）拮抗菌的拮抗能力和抗病效果评价

利用平板拮抗实验，对实验中获得的阳性菌株进行测试；拮抗效果好的菌株进行根结线虫的盆栽防效测试。

2.2 技术路线

3．试剂、材料计划清单

4．实验动植物计划

5．设备、器材（要求准确、完整，少量购置需注明供应商和价格）